細胞培養中常見的5大“誤區”，看看你占了幾個？

01. 誤區一

實驗室的細胞是不是都從公司買的？不全是！

1. 剛進實驗室，師兄師姐給我的細胞

2. 直接聯系細胞商購買各種細胞

3. 剛從隔壁課題組借了一盤細胞

細胞來源可能很多，但是我們需要確認的是：

1. 了解課題研究目的，以及細胞的基本信息，

2. 選擇正確渠道購買優質細胞，并附質檢報告

3. 正確培養與傳代，存儲種子細胞便于后續研究

常用細胞來源分為：原代細胞分離與永生化細胞系。

原代細胞分離大概分為以下流程：

需要用到的試劑：

1. 原代干細胞分離液（組織分離液）

2. 重組表達、無動物源成分、不含胰酶。

適用類型：

臍帶、脂肪、胎盤、牙髓等多種原代分離的干細胞，以及主動脈內皮、絨毛膜等。

02.誤區二

借來的細胞或名字相同的細胞，體系一樣就可以養好！

1. 所有產品都一樣，為什么細胞養不好？

2. 細胞名字一樣，培養體系應該不會有差別吧？

3. 血清一樣，換個基礎培養基應該問題不大的吧？

開展細胞培養前，需要認真學習細胞的基本知識，了解不同來源細胞的培養特性。對于不同來源的同一種細胞，不同培養體系下的形態學、功能學等存在差異，需要驗證是否符合研究需要后再開展大規模培養。借來的細胞需要適應環境與操作后再做功能學研究或者更換試劑等。

1. 培養環境、人員操作、產品批間差等均有影響

2. 請參考官方網站或文件，使用正確體系

3. 不同細胞對基礎培養基中一些成分適應性不同

4. 不論什么來源的細胞，都要按照正確的體系培養，才能獲得可重復的實驗結果！

03.誤區三

細胞復蘇操作不及時，接種后觀察不及時！

1. 水浴鍋的溫度未到37℃就解凍細胞

2. 同時操作多個凍存管，融化時間延長

3. 凍存管未做保護直接全部浸沒于水浴鍋中

4. 復蘇后就等著細胞長滿，期間不觀察

這樣的問題您有犯過嗎？細胞凍存復蘇講究“慢凍快融”，當然快融的操作也很重要。不然只能是無用功。

1. 水浴鍋37℃解凍，最好不超過1 min

2. 建議單管操作，避免交叉污染

3. 凍存管置于無菌PE手套中，再浸沒融化

4. 根據細胞特性，復蘇后及時觀察細胞生長狀態

04.   誤區四

細胞一定要長滿點再傳代，或多傳點長得快！

1. 細胞要長到90%-100%才可以傳代

2. 細胞融合度80%左右仍繼續培養

3. 細胞傳代密度高點，1傳1或1傳2

您是不是也是這樣認為呢？

但是，以下問題您有考慮過嗎？

1. 細胞長期高密度生長，更容易老化

2. 對數期細胞增殖速度快，容易聚團漂浮

3. 細胞傳代密度根據研究需要和細胞生長特性優化

05.誤區五

胰酶消化要等到細胞變圓才能終止，多吹打變成單細胞！

關于細胞消化以下做法是錯誤的示范手法：

1. 接觸新細胞培養，消化時間和其它細胞一致

2. 消化10 min仍然未脫落，用力吹打

所有細胞都是很嬌弱的，做好細胞消化，我們需要了解以下幾點：

1. 了解新細胞的特性再做培養與研究

2. 難消化的細胞可放37℃溫箱或換更強的消化液

3. 細胞間隙明顯，大片脫落可移動即可終止消化

4. 有些細胞消化后不會變圓形，半沙狀即可終止

NOTE：

1. 不是細胞形成單個圓形才算消化完全

2. 不是所有細胞消化后都會變圓形

轉自：細胞之邦公眾號

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